Twilight - Uusikuu -elokuva perustuu Stephenie Meyerin luomaan Twilight -kirjasaagaan ja se on jatkoa menestyselokuvalle Twilight - Houkutus.
Päähenkilö, 17-vuotias Isabella "Bella" Swan on rakastunut nuoreen vampyyri Edward Culleniin. Vampyyrin rakastaminen on kuitenkin vaarallisempaa kuin tyttö olisi koskaan voinut kuvitella. Nuorten suhdetta uhkaavat ennakkoluulot sekä läheiset ja rakkaat henkilöt. 18-vuotispäivän kynnyksellä Bella on surullinen, sillä hän ei haluaisi vanheta - Edward on ikuisesti 17-vuotias. Vastentahtoisesti vietetyillä syntymäpäivillä hän saa lahjapaperista haavan ja vuotaa verta verenhimoisten vampyyrien edessä. Perheen uusin "kasvissyöjä" Jasper sortuu veren himoon ja olisi valmis tappamaan Bellan samalla sekunnilla. Tämä saadaan estettyä, mutta Edward tajuaa, että Bellan on aivan liian vaarallista viettää aikaa hänen tai hänen perheensä kanssa. Hän jättää Bellan valehdellen, ettei rakasta tätä enää ja koko perhe muuttaa pois paikkakunnalta. Bella masentuu syvästi Edwardin poislähdön vuoksi. Bella hakee lohtua vanhalta perhetutulta, Jacobilta, ja heidän välille syntyy läheinen ystävyyssuhde. Pian Bella huomaa saavansa vaarallisissa tilanteissa hallusinaatioita, joissa kuulee Edwardin äänen. Bella, jälleen kerran harhaäänien toivossa, hyppää kalliolta veteen. Alice näkee hypyn, ja luulee Bellan tehneen itsemurhan. Edward saa kuulla tapahtuneesta ja tuntee kauheaa syyllisyyttä ja eikä tunnne kykenevänsä elää ilman Bellaa, joten hän päättää lähteä Italiaan anelemaan Voltureilta kuolemaa...